1.以無菌操作方式開啟凍干菌種管，加入適量培養(yǎng)液（按菌種選擇培養(yǎng)液，如細菌選擇營養(yǎng)肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基），吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。取含5.0 mL～10.0 mL相應培養(yǎng)液的試管，滴入少許菌種懸液，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、黑曲霉菌為30 ℃± 1℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第1代培養(yǎng)物。

2.用接種環(huán)取第1代培養(yǎng)物，或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠，劃線接種于相應培養(yǎng)基平板（按菌種選擇培養(yǎng)基，如細菌選擇營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復合瓊脂培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、分枝桿菌36 ℃± 1℃培養(yǎng)72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第2代培養(yǎng)物。

3.挑取第2代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于相應培養(yǎng)基斜面或平板（按菌種選擇培養(yǎng)基斜面，如細菌選擇營養(yǎng)瓊脂斜面、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復合瓊脂斜面、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基平板），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、分枝桿菌36 ℃±1 ℃培養(yǎng)72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第3代培養(yǎng)物。

4.取第3代培養(yǎng)物，接種于相應培養(yǎng)基斜面，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間，此為第4代培養(yǎng)物。5.1.5?按上述方法培養(yǎng)至所需代數(shù)，傳代時在試管上注明菌種名稱、菌種號、代數(shù)及傳代日期等基本信息。

本文節(jié)選自中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準《WS/T 683—2020消毒試驗用微生物要求》